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的使用注意事項及再生
2011-12-24 [3524]

液相色譜柱的使用注意事項及再生
 
1 、色譜柱的使用說明:
( 1 )、 色譜柱使用前注意事項:
色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應(yīng)先用 10 %左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。
( 2 )、 流動相:
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過 0.45μm 的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 , BDS C18 適合于堿性化合物, PH 值適用范圍為 2.0-10.0 。當(dāng)必須要在 PH 值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來所使用的流動相。
( 3 )、 樣品:
樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱( SPE )對樣品進行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴格脫水。
2 、色譜柱的保存
( 1 )、 反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):
使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應(yīng)用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗 30 分鐘。 注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入 10% 的甲醇,防止將填料沖塌陷。
( 2 )、 長期保存色譜柱:
如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
3 、色譜柱的再生
因為色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加,會出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來說可能是柱效下降。
( 1 )、 反相柱的再生 : 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇:水 =10 : 90 ( V/V ),乙腈,異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
( 2 )、 正相柱的再生 : 依次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
4 、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點:
( 1 )、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染;
( 2 )、色譜柱頭的填料被樣品污染;
( 3 )、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結(jié)晶析出;
( 4 )、流動相 PH 值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決辦法如下:
( 1 )、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在 10 %的稀硝酸內(nèi)超聲清洗 10 分鐘,后再用純水超聲 10 分鐘,重新裝入色譜柱。
( 2 )、如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲。
( 3 )、如確定定是鹽結(jié)晶,用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
( 4 )、如果因 PH 值使用不當(dāng),很難恢復(fù)。
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